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技術(shù)文章

畜禽中土霉素、四環(huán)素、金霉素含量的液相色譜測定

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畜禽中土霉素、四環(huán)素、金霉素含量的測定

 

一.儀器

  液相色譜儀,紫外檢測器。

二.試劑

  土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取0.0100g(±0.0001g)土霉素,用0.1mol/L鹽酸溶液溶解,并定容至10.0mL ,即每毫升含土霉素1.0mg。

  四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取0.0100g四環(huán)素,用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并定容至10.0mL ,即此溶液每毫升含四環(huán)素1.0mg。

  金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液:稱取0.0100g金霉素,用蒸餾水溶解并定容至10.0mL ,即此溶液每毫升含金霉素1.0mg。  

  混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:取土霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液、四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0mL,金霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0mL置于10.0mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度。此溶液每毫升含土霉素、四霉素各0.1mg、金霉素0.2mg,臨用時現(xiàn)配。

三.實驗步驟

  1.樣品處理

  稱取5.00g(±0.01g)切碎的肉樣(<5mm),置于50mL的錐形燒瓶中,加入5%高氯酸25.0mL于振蕩器上振蕩提取10min,移入離心管中,以2000r/min離心3min,取上清液經(jīng)4.5μm濾膜過濾,以此液進行HPLC分析。

  2.液相分析參考條件  

  ① 色譜柱:ODS--C18(5μm),6.2mm×15cm。

  ② 流動相:乙腈+0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液[用30%(體積分?jǐn)?shù))硝酸溶液調(diào)節(jié)pH至2.5][35:65(體積比)]。

  ③ 流速:1mL/min。

  ④ 檢測波長:355nm。

  ⑤ 進樣量:10μL。

  3.樣品測定  

  吸取四、1.處理好的溶液10 μL,注入液相色譜儀,進行HPLC分析,記錄峰高,從工作曲線上查的含量。

  4.工作曲線的制備

  稱取7分切碎的肉樣,每份5.00g,分別加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液0μL,25μL,50μL,100μL,150μL,200μL,250μL,()()(含土霉素、四環(huán)素各為0.0μg,2.5μg,5.0μg,10.0μg,15.0μg,20μg,25μg,含金霉素0.0μg,5.0μg,10.0μg,20.0μg,30.0μg,40.0μg,50.0μg),與樣品同樣操作。以峰高為縱坐標(biāo),以抗生素含量為橫坐標(biāo),繪制工作曲線

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